一直以来食品药品的安全问题和监督管理都是国家相关政策实施的重点，也是普通百姓舆论关注的焦点。如何确保食品药品的安全和质量，如何改进相关的生产工艺流程，如何提升优化生产过程中的原、辅料应用，这些都成为了当今科研工作者研究和探索的潮流热点之一。本次论文的研究目的即是充分探讨荷叶当中的荷叶碱（Nuciferin）在食品药品生产过程中的具体应用以及验证检测其抑菌作用的作用机理现象和相关数据，为国内的荷叶碱的相关基础研究领域进一步填补空白，同时也为今后对荷叶碱的进一步发展应用提供理论和实验依据[1-3]。
荷叶作为一种天然、安全有效的保健食品和药物，有清热解暑、升发清阳、凉血止血的功能,用于暑热烦渴、暑湿泄泻、血热吐衄、便血崩漏等的治疗，越来越受到人们的青睐，并且入选中国卫生部“既是食品, 又是药品”的植物名录。荷叶，在我国的资源十分丰富，主要分布在中国的长江、黄河和珠江三大流域。它因含有生物碱、类黄酮、挥发油、有机酸以及植物固醇等多种功能性成分而具有显著的药食疗功效。荷叶中含有的荷叶碱是一种阿朴啡型生物碱，药理研究表明其为荷叶中主要的降脂成分，抗自由基、抗病毒、抗惊厥、抑制高胆固醇血症和动脉硬化等药疗、食疗功效，而且还具有抗有丝分裂的作用，有较强的抑菌效果。因其对CFTR Cl－通道的激活、降血糖、抗氧 化抗衰老、抗心率失常和解痉等方面的作用，目前临床上主要用于预防和治疗肥胖。而在食品保健方面，荷叶碱具有优秀的减肥功效，故常被用来改善油腻饮食习惯，如荷叶茶等减肥茶饮品的开发，以及荷叶粥、荷叶肉、荷叶汤等民间传统食品的广泛流传。
在国内，有关荷叶生物碱的相关研究近年来一直都有。其中，对荷叶碱的提取工艺的优化和高纯度荷叶碱的制备，已经有了极大的进展，上海、湖南等地的原料药物制备厂家都能够生产出80%以上的高浓度荷叶碱。这使得荷叶碱在食品保健和药物应用方面的全面快速发展有了极大的基础支撑，其受众面将得到广泛提升。而荷叶碱作为天然食品防腐剂的开发应用也将获得更多关注，深入探索荷叶碱抗有丝分裂的作用机理以及其抑菌活性的检测分析也就成为重中之重。研究表明：荷叶生物碱提取液对细菌、酵母、霉菌都有较强的抑菌作用，在碱性环境较酸性环境显著，对大多数细菌酵母的MIC（最小抑菌浓度）不超过12%；高温长时间处理和中低温长时间处理对提取液抑菌活性影响较大，但高温段时间处理则影响不大[6]。
在国外，荷叶生物碱的分离纯化的技术工艺较国内更为先进。研究者应用高速逆流色谱法和离子流微波辅助提取法对荷叶当中的生物碱进行了更快速、更有效的提取。且主要针对荷叶碱在抗病毒、抗心律失常等方面进行研究。而对于荷叶碱在食品应用方面的探讨整理较少[5]。
综上所述，深入探讨和研究荷叶碱的抑菌作用的作用机制和相关参数，对其在食品药品的天然防腐剂的应用与开发上有着重要意义。
大量研究表明荷叶碱具有较强的抑菌作用，能够通过干扰有丝分裂进程来抑制大部分细菌和霉菌的繁殖。故此次论文实验研究的重心主要根据这一点展开设计和相关实验。分别采用纸片扩散法和微量稀释法检测大肠杆菌的MIC（最小抑菌浓度）。综合两种方法所得结果，确定荷叶碱的最佳抑菌浓度[4]。
纸片扩散法检测：制备抑菌药液 取98%的高纯度荷叶碱粉末，用甲醇配制成0.010mg/ml的溶液，再梯度稀释成0.009mg/ml~0.001mg/ml的溶液。制备菌悬液 选择大肠杆菌为供试菌种,预先用培养基进行活化培养12h,用无菌生理盐水洗脱制成含菌约10^9cfu/ml的菌悬液。抑菌检测 将直径为6.0mm的滤纸片湿热灭菌后干燥,置于各浓度药液中浸透,然后在较低温度下干燥备用。 用无菌吸管吸取试验菌悬液0.1ml加人已倒好的平皿培养基表面(牛肉膏琼脂培养基 ),涂布均匀。再用无菌镊子夹起各药液滤纸片放人含菌平皿上,每皿4片 , 用同一含量的甲醇浸泡片作空白对照。经37℃恒温培养24h , 准确量取抑菌圈直径, 取4 次的平均值。记录数据。
微量稀释法检测MIC：菌悬液的制备 取大肠杆菌保存液10mu;L加入1mlMH肉汤，置37℃恒温培养12h，用无菌生理盐水梯度洗脱至约10cfu/ml，此时菌液即为上样菌悬液。抑菌药液配制 同上，制成1000mg/ml的溶液。抑菌实验操作 在无菌96孔板1-11列加入MH肉汤1 ml，第1列加入抑菌原液1 ml，逐次倍比稀释至第11列（每孔液体终体积是1 ml）。再每一孔加入菌液1 ml(为保证实验的可靠性，同一株菌做两行，一板可做四株，此次只做两株)。在无菌96孔板的第12列上2孔加入2ml灭菌MH肉汤作为阴性对照，下2孔加入2ml菌液（两株菌的菌液）作为阳性对照。上样完毕后，盖好板盖，置37℃恒温培养24小时，观察结果。
经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定的抑菌圈直径之间大致呈线性关系，因此将两种方法相对测试所得数据进行统计学的相关回归处理，可得一条回归线，依此可推断该菌株的MIC。以此作为天然防腐剂应用开发中荷叶碱的最佳有效浓度的参考数据。
以上两组实验均须在灭菌条件下操作。菌悬液的配制浓度可能需要根据实验情况具体调整。
