开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究背景
川牛膝为苋科植物川牛膝Cyathula officinalis Kuan 的干燥根。主产于四川、云南、贵州。其为著名的川产道地药材, 如清代汪昂的《本草备要》中有出西川及怀庆府，长大肥润者良。 【1】的记载。川牛膝味甘、微苦，性平；归肝、肾经；具有活血通经，祛风除湿，通利关节，利尿通淋【2】的功效，其主治血瘀经闭，痛经，难产，胞衣不下，关节痹痛，足痿筋挛，尿血，血淋，跌扑损伤等病症，为临床常用药，为1977年以后各版《中国药典》所收载。
川牛膝含有多种化学成分，据现代研究分离得到的有四类较为常见。第一类为甾类化合物。如杯苋甾酮（cyasterone）、异杯苋甾酮（isocyasterone）、红苋甾酮（rubrosterone）5-表杯苋甾酮（5-epicyasterone）、后甾酮（poststerone）、前杯苋甾酮(precyasterone）羟基杯苋甾酮(sengosterone)、苋甾酮A及B（amarasterone A,B）、头花杯苋甾酮（capitasterone）等。2010版《中国药典》中规定川牛膝的含量测定需根据杯苋甾酮峰进行计算，且其理论塔板数不低于3000。第二类为黄酮类化合物。Nicolov Stefan【3】等人应用2-D纸色谱方法从牛膝中提取分离得到了3种黄酮化合物如槲皮素-3-芸香苷(芸香苷)、槲皮素-3-O-葡萄糖苷(异槲皮素)、山柰酚-3-O-葡萄糖苷。第三类化合物为多糖类化合物。Yu,Biao【4】等从牛膝中得到一种具有增强机体免疫系统活性的多糖类成分。方积年等【5】从牛膝中得到的有免疫活性的肽多糖ABAB。第四类化合物为皂苷类化合物。牛膝中含有多种皂苷类成分，报道分离鉴定的皂苷均为以齐墩果酸为苷元的三萜皂苷。三萜皂苷经水解后生成齐墩果酸、葡萄糖醛酸等。齐墩果酸是生药怀牛膝的主要有效成分之一，属五环三萜类化合物，具有保肝，护肝、强心等作用。此外,川牛膝中还含有有机酸、甜菜碱等化合物，因而川牛膝也展现出多种药理作用。
川牛膝的药理作用丰富，如对血液系统、糖代谢、神经系统等均有作用，另外其还有抗骨质疏松、调节免疫、抗肿瘤等作用，且其作用范围广泛，具有良好的临床意义。在血液系统方面，牛膝具有抗凝血、改善血液流变学、抗动脉粥样硬化以及降血压的药效。例如司力【6】，吴旭，杨研华等均对牛膝总皂苷【7，8】进行研究，发现其具有有效保护实验性内皮细胞的损伤，从而起到抗动脉粥样硬化的作用。王丽君【8】等证明三萜皂苷可能是其降压活性成分。在糖代谢方面，陈秋【10，11】等发现牛膝中蜕皮甾酮能够增加HepG2细胞对葡萄糖的消耗量，且这种作用是非胰岛索依赖性的；在胰岛素抵抗细胞模型中蜕皮甾酮能增加胰岛素的敏感性，改善体内糖代谢。薛胜霞【12】等认为牛膝多糖及其衍生物具有降糖作用，并且以硫酸酯衍生物降糖效果最佳。在神经系统方面，牛膝的多肽类物质对神经生长具有保护作用。在免疫系统及抗炎方面，牛膝根提取液有较强的抗炎消肿作用,此并非通过肾上腺皮质释放皮质激素所致,其机理在于牛膝可提高机体免疫功能,激活小鼠M5对细菌的吞噬能力以及扩张血管、改善循环、促进炎性病变吸收等作用【13】。在泌尿生殖系统及抗生育方面，如川牛膝流浸膏使猫的未孕子宫呈弛缓现象,而受孕子宫则发生强有力的收缩。对离体大鼠子宫的作用却相反,川牛膝呈抑制作用。且川牛膝及怀牛膝的苯提取物对小鼠均有抗生育、抗早孕和抗着床的作用。在延缓衰老方面，李献平【14】等以家蚕为实验动物，得到活血化瘀偏胜的川牛膝的延寿作用优于补益肝肾偏重的怀牛膝的结论。而在在补益方面近年有研究报道，川牛膝含的昆虫变态激素、脱皮甾酮、杯苋甾酮有促进蛋白质合成、抗血小板聚集等活性，与川牛膝补肝肾、强筋骨功效相符【15】。在抗骨质疏松方面，牛膝是一种补骨中药，崔洪英【16】的研究中，牛膝等补骨中药可减轻大鼠子宫的重量，增大骨小梁的密度、面积、总体积及密质骨面积，减小骨髓腔面积。
二、研究目的与意义
传统的川牛膝成品质量评价主要以外部形态、个头大小以及简单的检查衡量其优劣，《中华人民共和国药典》2010年版一部收载杯苋甾酮作含量测定项。前期研究证明川牛膝含有大量皂苷类化合物，可以作为含量测定项对川牛膝进行质量控制，本课题欲将分离植物中两种含量较高的皂苷类化合物，并鉴定其结构，为传统中药川牛膝的质量标准化提供科学依据。
三、课题内容
药材：川牛膝
实验仪器及试剂：柱层析硅胶（青岛海洋化工厂）；薄层色谱硅胶GF254（烟台化工研究所）；Sephadex LH-20；LC-8A制备液相（Shimadzu公司）；AUW-120D电子天平（Shimadzu公司）；LCSolution（紫外:SPD-20A，泵:LC-20AT；Shimadzu公司）；R-502、R-201旋转蒸发器（上海申盛生物技术有限公司）；分析甲醇（江苏汉邦科技有限公司）；色谱甲醇（江苏汉邦科技有限公司）；药用乙醇；蒸馏水等。
