开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）1：拟研究的问题 本实验室前期研究成果表明cell death-inducing DFFA effector family C（Cidec）属于脂滴相关蛋白并在调节脂滴融合中起关键作用，具体表现为Cidec大量富集于脂滴膜接触位点并促进中性脂质从较小的脂滴转移到较大的脂滴。
研究还表明Cidec促进脂滴融合和生长的功能不是单独作用的，而是与其他蛋白，如Perilipin 1 (PLIN1)等形成复合体而发挥作用的，因此研究可与Cidec产生相互作用的蛋白对了解Cidec调控脂滴融合非常重要。
本课题拟利用GST-pull down结合质谱鉴定的方式筛选Hela细胞裂解液中Cidec的相互作用蛋白，然后对结果的综合分析阐述可Cidec介导脂滴融合的潜在机制，为最终实现药理性调控细胞内脂滴生长和融合提供依据。
2：实验方案2.1 Cidec相关原核表达质粒的构建本实验室前期研究发现Cidec在真核细胞中的表达量非常低，且存在稳定性较低的问题，因此，本研究计划通过原核表达系统获取足量的蛋白进行互作筛选。
首先我们构建可表达Cidec全长蛋白（Cidec-FL）、Cidec-N端(39-119)和Cidec-C端(206-239)截短体的GST融合蛋白的质粒。
本实验室可提供Cidec基因序列和pGEX-4T载体，该载体上带有谷胱甘肽巯基转移酶标签（N-GST标签），可提高目的蛋白的可溶性和表达量，且有利于后续GST-pulldown实验。
2.2 Cidec相关蛋白的表达、纯化和挂柱将构建好的质粒转化到BL21感受态菌内，并在培养好的大肠杆菌菌液内加入IPTG诱导表达目的蛋白，诱导过夜后裂解大肠杆菌获取上清蛋白溶液，之后再通过GST-beads纯化蛋白。
2.3 GST融合的Cidec相关蛋白的互作蛋白筛选与验证将正常培养的Hela细胞裂解液与原核表达纯化得到的GST-Cidec-FL、GST-Cidec-N和GST-Cide-C混合共孵育8h，然后将混合物进行SDS-PAGE凝胶电泳，考马斯染液染色再脱色。
2.4互作蛋白质谱鉴定结果的检索和分类将蛋白胶上的可能的相互作用蛋白复合体送实验室质谱平台检测，得到结果后进行数据整理和归类。
