基于黄嘌呤氧化酶及表位研究其抗体抑制剂
研究背景：
人体内的尿酸来源于两个方面：人体内自身或高嘌呤、高蛋白饮食中所含的核酸、嘌呤类化合物经酶分解代谢作用生成，黄嘌呤氧化酶（简称XO）就是上述参与分解代谢的其中一种关键酶，简而言之，人体内的嘌呤类化合物转化成为尿酸的量的多少，与黄嘌呤氧化酶有密切关系[1]。因此，尿酸是体内腺嘌呤核苷的分解代谢产物，一种原因是人体由于嘌呤摄入过多、嘌呤代谢紊乱或嘌呤代谢增加等原因，导致体内嘌呤含量过高进而导致尿酸产生过多，另一种原因是尿酸排泄减少，两者都会导致尿酸浓度超标（它在血液中的最高溶解度为416mu;mol/L），高于416mu;mol/L就可认定为患高尿酸血症，高尿酸血症与很多恶劣病症的产生有关，不仅有一定几率会发展成为痛风，还与糖尿病、心血管疾病等疑难杂症密切相关[2-3]，因此，降低人体内的尿酸水平是治疗高尿酸血症，预防与之相关的病症发生的首要解决事项。到目前为止，针对尿酸产生途径的降尿酸药（urate-loweringagents, ULA）可分为两大类——促尿酸排泄药与抑制尿酸合成药，其中后者通过发挥黄嘌呤氧化酶抑制剂的作用从而降低尿酸[4]。黄嘌呤氧化酶抑制剂简称XOI，一直以来，因相关病症患病人群较少等原因，在此之前对XOI的研究都进展较缓慢，已上市的典型药物只有别嘌醇，至今仍用于临床治疗高尿酸血症。然而，由于别嘌醇的使用常伴随有过敏、胃肠道反应、肝肾功能损伤、骨髓抑制甚至有未明原因的死亡等严重副反应，在一定程度上也限制了其临床应用[5]。目前，有越来越多的研究者开始关注这块领域，相信随着研究的不断深入开展，可以开发出越来越多有实际应用价值的黄嘌呤氧化酶抑制剂，造福人类。而据文献报道，目前主要有以下几类的黄嘌呤氧化酶抑制剂XOI：嘌呤类似物XOI、非嘌呤类似物XOI和其他类XOI。
第一类抑制剂中有些化合物活性比别嘌醇还要好，此前就有研究称某些鸟嘌呤和腺嘌呤类似物活性较别嘌呤要好，Yoshida等发现一系列活性半数抑制率（IC50值，该值越低，说明抑制率越高）约为别嘌呤醇十分之一的嘌呤类似物[7]，这些化合物中，8-(4-异丁氧基-3-硝基苯基)-2-羟基嘌呤的IC50值为11.1nmol·L-1(别嘌醇IC50值为5.9mu;mol·L-1)，对黄嘌呤氧化酶抑制率达50%，在该类抑制剂中活性最高[6]；Naeff等[8]研究黄嘌呤和次黄嘌呤类似物发现，8-芳基黄嘌呤和8-芳基次黄嘌呤也可以抑制黄嘌呤氧化酶，并且对此类抑制剂结构研究发现，苯环取代与否和苯环取代位置对化合物活性均有影响。
非嘌呤类似物抑制剂中不得不提的是由日本Teijin开发研究的非布索坦（febuxostat，TEI-6720），它是噻唑羧酸衍生物，与别嘌醇具体作用机制不同，已经上市且应用于临床，具有强大、持久的降尿酸作用，显示出极佳的治疗效果[9-10]。临床研究表明，非布索坦疗效极佳，但仍表现有头痛、腹泻、关节疼痛、肝功能异常等不良反应，但安全性表明其对肝肾衰竭患者无影响。虽然它的价格要比别嘌醇高，但它对肝肾衰竭患者无影响的优点使它可以被用于有轻中度肾功能不全的患者；第二种是Piraxostat（Y-700），Y-700为日本Welfide公司研制，属芳基吡唑衍生物,该药目前处于临床前研究阶段；第三种是化合物FYX-051。研究发现化合物FYX-051是牛乳黄嘌呤氧化还原酶的有效抑制剂，且它表现出对氧嗪酸诱导的高尿酸血症大鼠高效且长期的降尿酸效果[11]；目前，FYX-051已于2009年进入临床Ⅱ期试验阶段，它将是一种新型强效的混合式XOI，是临床治疗高尿酸血症的一个有希望的候选者，极具研发前景。对于以上有潜力的化合物的研究进展对于相关病症患者来说无疑是个好消息。
其他类抑制剂一般是从天然产物及其衍生物中提取纯化，这也是一种开发新型XOI的重要途径。祁鑫等[12]选取不同蔬菜提取其活性成分，将其进行筛选，得出蒜，生姜和山药的活性提取成分抑制效果最好；将玉米须由不同溶剂（水、不同浓度乙醇）和不同溶剂提取物（水、正丁醇、乙醚和乙酸乙酯提取物）纯化，结果显示不同溶剂中，玉米须经50%乙醇纯化；不同溶剂提取物中，玉米须经乙酸乙酯提取物纯化得到的活性物质和对黄嘌呤氧化酶有较强抑制功效[11]；此外，还有研究称，我们日常生活中的常见食物蜂胶（中国产）、芹菜籽中提取的有效成分也具黄嘌呤氧化酶抑制作用[13]，可以降低血清尿酸含量。而其中黄酮及查尔酮类化合物最具有研究价值，是开发为有实际效用XOI的有力候选化合物。黄酮类化合物可以由不同浓度乙醇和乙酸乙酯从中草药中提取纯化出来,如枳椇子、苏木、高良姜，结果显示上述三者乙醇提取出的活性成分对黄嘌呤氧化酶的抑制作用较强[14-15]，因此，可对上述三种化合物继续纯化得到高效活性成分，在之后的实验中深入研究。
一直以来由于研究人群较少，XOI研发进度较为缓慢，近年来，随着经济水平不断提高，人们生活习惯改变，高尿酸血症患病人群升高明显，引起了研发人员对黄嘌呤氧化酶抑制剂研究的重视，自从二十世纪60年代研发应用以来，别嘌醇一直作为临床使用的XOI的代表，但同时别嘌醇的使用伴随着显著的副反应，因此开发高效低副作用的XOI对于广大患病人群来说十分迫切，有巨大应用价值。一些活性较好、抑制率也较高的化合物目前陆续进入临床试验阶段，少数已上市，虽然仍有不同的不良反应，但经过不断优化和创新，相信很快会有有实际效用的XOI被研发出来。
因此本次实验，我们建立STZ注射的1型糖尿病小鼠模型；然后给正常组、未造模组、造模组分别免疫，同时每周监测小鼠血糖、体重；酶标仪测定小鼠尿酸浓度，ELISA测定抗体滴度得到其效价；脾细胞增殖培养，最后将脾细胞与骨髓瘤细胞融合获取杂交瘤细胞。
立题依据：
