一、拟研究或解决的问题
麦芽糖苷酶是存在于人小肠刷状缘微绒毛的一种alpha;-葡萄糖苷酶,该酶传统的工程菌生产方式使得后续的蛋白提纯过程耗时耗力。近年来,随着酵母细胞表面展示技术的不断成熟,其在高亲和力抗体及多肽药物筛选等多方面得到广泛应用。通过麦芽糖苷酶的毕赤酵母细胞表面展示,展示酶可方便快捷地用于相应抑制剂的筛选以助于2型糖尿病药物的研发以及酶蛋白的分析提纯等。
二、研究内容
1、pPICZalpha;A-sag1-MAGM质粒的构建
利用限制性核酸内切酶和DNA连接酶构建载体
2、质粒转化到毕赤酵母细胞中
电击法
3、菌株培养
前期以甘油作为主要碳源使菌体大量繁殖,后期以甲醇诱导目的基因表达
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