LC-MS/MS法研究麻黄碱的跨膜转运机制
1.文献综述
麻黄是麻黄科植物草麻黄(Ephedra sinice Stapf)、中麻黄（Ephedra intermedia Schrenk et C.A.Mey)或木贼麻黄（Ephedra equisetina Bge）的干燥草质茎，其性温，味辛、微苦，归肺、膀胱经。有发汗解表，宣肺平喘，利水消肿的功效[1]。麻黄的成分十分复杂，含有生物碱类、黄酮类、挥发油、多糖、酚酸类等多种成分。生物碱类被认为是麻黄中主要的有效成分，分别为麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、甲基伪麻黄碱、去甲基麻黄碱、去甲基伪麻黄碱[2]。《中国药典》2015版采用盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱作为麻黄药材的质量控制指标。根据现有对麻黄生物碱的药代动力学研究表明，麻黄生物碱在心脏、肝脏、脾脏、肾脏中都有较高分布[4]。过量或长期使用麻黄容易引起明显的毒副作用，除了引起心血管系统和神经系统不良反应外, 还可能致严重肝损害[7]。目前，对麻黄可能通过某种机制导致肝损害以及引起药物性肝病的物质基础和途径都尚不明确，需要进行深入研究。
肝脏是参与药物代谢与排泄的重要器官，肝细胞上分布有多种转运体，可以介导肝对药物的摄取和外排，影响药物在肝组织的分布［5］。肝脏中的转运体分为溶质运载体 (SLC) 和ATP结合盒超家族转运蛋白两类，分别介导物质从血液进入肝细胞以及从细胞内外排到胆汁或返回血液的过程[3]。肝脏摄取型转运体主要包括：有机阴离子转运多肽(organic anion-transporting polypeptides，OATPs)、有机阴离子转运体（organic anion transporters，OATs）、有机阳离子转运体(organic cation transporters，OCTs)以及钠离子/牛磺胆酸共转运多肽 (sodium/taurocholate cotransporting polypeptide，NTCP)。肝脏中外排转运体主要包括：表达于胆小管侧的 P-糖蛋白(P- glucoprotein, P- gp)、多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance associated protein 2, MRP2)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein, BCRP)、BSEP 及 MATE1，和血窦侧的 MRP3、MRP4、MRP6 以及 OSTalpha;-OSTbeta;。
HepG2 细胞来源于人肝胚胎瘤细胞，该细胞高度分化且与人源肝细胞有许多共同特征，且表达有多种重要代谢酶和转运体,能够提供关于药物的摄取转运及代谢等信息[6]，已广泛用于药物在肝脏上转运作用的研究，而且该细胞易获得，易于培养且生长迅速，适合药物的高通量筛选及药物在肝细胞中转运机制的研究。
近年来，麻黄在临床应用中导致肝损害的病例报道不断，但麻黄生物碱进出肝脏的转运方式及机制尚不明确。本实验旨在建立测定麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱在肝细胞中含量的LC-MS /MS方法，并在此基础上利用HepG2 细胞模型研究这三种麻黄生物碱在肝细胞中跨膜转运特性，探讨其细胞摄取、外排与转运体的内在联系，为指导麻黄碱及麻黄产品的临床合理、安全用药提供理论参考。
2.拟研究或解决的问题
2.1色谱检测条件的摸索
确定色谱柱的类型、内标物的种类，对流动相的组成与比例、柱温、流速、检测器等色谱条件进行摸索。
