门冬酰胺酶Ⅱ的酶活测定方法优化文献综述

 2023-02-10 20:23:50

课题背景:L-门冬酰胺酶(L-asparaginase,EC3.5.1.1)广泛存在于动物的组织、细菌、植物和部分啮齿类动物的血清中,但在人体的各种组织器官中的分布未见报道。

L-门冬酰胺酶是一种重要的抗肿瘤药物,多年来一直是小儿急性成淋巴细胞性白血病和淋巴肉瘤临床化疗中重要的配伍药物之一。

用微生物,特别是大肠杆菌来生产L-门冬酰胺酶已有广泛深入的研究。

大肠杆菌能产生2种天冬酰胺酶,即L-门冬酰胺酶Ⅰ和L-门冬酰胺酶Ⅱ,分别由其染色体上基因ansA和ansB编码。

只有L-门冬酰胺酶Ⅱ才有抗肿瘤活性。

构建高效分泌表达L-门冬酰胺酶Ⅱ的基因工程菌,重组L-门冬酰胺酶Ⅱ(rL-ASPⅡ)在大肠杆菌细胞中合成后分泌到细胞周质中。

表达的rL-ASPⅡ相对分子质量为138 356 Da,pI为4.85,紫外最大吸收值在278nm处。

rL-ASPⅡ酶活性的测定参照Peterson的方法修订。

将每分钟催化L-门冬酰胺水解释放1mu;g分子氨所需的酶量定义为1个酶活力单位(OD500=0.07时为1 U)。

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