1 实验目的动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)是一种临床常见的慢性病,严重危害人类健康,血脂异常是动脉粥样硬化的主要致病原因之一。
从大豆中发现的新型天然生物多肽Lunasin具有良好的抗炎症潜力,可作为治疗动脉粥样硬化的新型药物。
本实验拟通过高脂饲养构建ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型,通过统计分析小鼠身长、尾长、进食量变化,对主动脉切片HE染色观察病变形态,并对血浆中甘油三酯(TG)水平进行测定,研究多肽Lunasin对动脉粥样硬化的治疗作用。
2 实验方法首先用BCA法测定实验用Lunasin的浓度,然后通过高脂饲养构建ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型。
选用健康雄性ApoE-/-小鼠60只,SPF级,8周龄,16-20g,所有实验动物均购自南京市青龙山动物繁殖场,饲养条件为室温20-25℃,湿度40-60%,每天明暗各12小时,适应性饲养一周后进行实验。
20只ApoE-/-小鼠给予普通饲料,随机分为2组,每组10只,分别作为正常对照组、阴性对照组;40只ApoE-/-小鼠给予高脂饲料,随机分为4组,每组10只,分别作为空白对照组以及3组实验组(低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组),饲养12周。
实验组以Lunasin灌胃给药,每天一次,根据小鼠体重换算,得到低、中、高三组给药剂量分别为0.125mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg体质量;阴性对照组以同等体积生理盐水灌胃;正常对照组与空白对照组不作处理。
每天灌胃给药时记录小鼠的进食量变化,每周测量并记录小鼠的体重变化数据。
12周后空腹采集静脉血样本,检测血清血脂水平;采血后将小鼠麻醉,使用PBS缓冲液进行灌注,并采集主动脉样本,采集后用PBS将主动脉样本清洗干净,置于4%多聚甲醛中固定24小时,进行HE染色,在电子显微镜下观察结果。
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