开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题来源、选题依据和意义
“脑卒中”（cerebral stroke）又称“中风”、“脑血管意外”（cerebral vascular accident，CVA）。是一种急性脑血管疾病，是由于脑部血管突然破裂或因血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起脑组织损伤的一组疾病，包括缺血性和出血性卒中。缺血性卒中的发病率高于出血性卒中，占脑卒中总数的60%～70%。而脑缺血常常伴随一系列缺血反应[1] ，包括胞内钙离子超载，兴奋性氨基酸的释放，各种酶的激活以及自由基的形成和缺血性再灌注伴随的炎症反应，从而最终导致缺血部位的坏死。其中，氧自由基是含未配对电子的离子，分子，原子或基团，是不稳定的化学物质，它是由氧诱发产生的。李等[2]研究表明，脑卒中后生成的氧自由基及其衍生物包括超氧阴离子，过氧化氢，羟自由基等，其中以羟自由基危害最大。在缺血性脑卒中，现公认的氧自由基产生主要包括，黄嘌呤氧化酶增多，中性粒细胞激活，线粒体功能受损等。
已有大量的证据表明，氧化应激在缺血性的组织损伤中是一种重要的中介反应。活性氧[3]（reactive oxygen species，ROS），在低水平时参与细胞的新陈代谢、机体防御及某些活性物质的合成；然而在高水平时，它促进缺血性脑卒中等血管相关性疾病的发生和发展。研究[3]发现脑缺血发生后，缺血再灌注超过约4.5 h,脑细胞中线粒体被破坏，氧代谢产生的ATP不能被利用，再灌注血液中氧在黄嘌呤氧化酶、NADPH 氧化酶、线粒体酶的作用下产生氧自由基。同时脑缺血再灌注损伤细胞内 Ca2 增加，激活磷脂酶A2，导致花生四烯酸释放，通过花生四烯酸途径增加ROS。大脑缺血再灌注，破坏固有防御系统，促进自由基连锁反应，导致氧自由基大量产生。自由基的产生破坏内皮细胞层，使血管通透性增加，加重局部脑水肿，导致局部脑血流量减少，进一步加重脑损伤。因此，在治疗脑卒中时,要从整体上系统消除机体内自由基的损害,重视改善缺血带来的机体内环境变化。[4]
自由基清除剂是指能与体内自由基结合并使之清除,从而保护机体免受自由基带来的的氧化损伤的一类物质的总称。其按照来源来分,可分类为外源性,机体内源性以及中药类清除剂。其中外源性合成[5]的主要有依达拉奉，硝酮类化合物，如NXY-059，STAZN,TBN等，21-氨基类固醇类，依布硒，金属卟啉类；内源性自由基清除剂主要有SOD，褪黑素，雌激素，尿酸，维生素类；中药类清除剂已报道的主要有多酚类化合物如绿茶多酚，黄酮类化合物等。银杏(Ginkgo biloba)为银杏科银杏属落叶乔木, 有裸子植物活化石之称, 其叶、果实、种子均有较高的药用价值。近年来, 人们发现银杏叶有抗氧化的功效, 它可以减少自由基对人体细胞的侵害，通过抑制糖氧剥夺缺氧/复氧损伤的神经元细胞活性氧释放，降低脑卒中的损害。银杏叶中含有大量的黄酮类和内酯类化合物，吕平[6]等通过研究在添加大肠杆菌提取物情况下其自由基清除率的变化，已证实银杏叶中黄酮类提取物在羟自由基，过氧化氢清除上起主导作用,而内酯类提取物作用不明显。谭华等[7]研究发现银杏黄酮甙和银杏苦内酯是氧自由基的捕捉剂和清除剂 ，参与清除氧自由基，抵制脂质过氧化反应，使血清SOD活性升高，丙二醛含量明显下降，抑制自由基诱导的细胞凋亡，从而起到保护脑细胞的作用。
大量研究表明,自由基损伤在缺血性脑损害中起关键作用,是造成脑缺血/再灌注不可逆损伤的重要因素,因此寻找合适的抑制活性氧释放的物质也成为治疗的有效方案。本实验拟在对银杏叶提取物内的成分进行有效筛选，筛选出对糖氧剥夺缺氧/复氧损伤的神经元细胞活性氧释放有抑制作用的化合物。
2.课题研究目标：
银杏叶提取物有良好的抑制糖氧剥夺缺氧/复氧损伤的神经元细胞活性氧释放作用，本实验用糖氧剥夺缺氧/复氧损伤的神经元细胞为模型，以银杏叶提取物内化合物对其活性氧释放的抑制作用来筛选具有抗活性氧释放，减少脑缺血再灌注损伤的成分。
3．课题研究内容：
本实验拟采用糖氧剥夺缺氧/复氧损伤的神经元细胞为模型，对银杏叶提取物中具有抑制神经细胞活性氧释放的化学物质进行筛选。
