AKT2在高脂饮食导致心肌脂毒性损伤中的作用和机制研究文献综述

 2023-02-08 21:18:42

一.拟研究的问题 AKT2在高脂饮食导致心肌脂毒性损伤中的作用和机制研究。

二.研究目的通过细胞和动物实验验证AKT2在高脂饮食导致心肌损伤过程中的作用及相关分子机制。

三.实验方法1.动物分组新生小鼠分为野生型(WT)和 AKT2 基因敲除(AKT2 KO)组,每组各 10 只,两组均高脂饮食和饮水。

在 WT 和 AKT2 KO 小鼠达到 16周龄时,检测相关指标,具体包括小鼠体重/净重,观察AKT2 KO 和 WT 小鼠体型,测量脂代谢等指标,包括胆固醇和甘油三酯含量的测定,以及检测AKT2及与心肌脂肪酸代谢相关分子的表达。

2.体外分析提取和培养原代乳鼠心肌细胞(neonatal cardiomyocytes,NRCMs),用siRNA转染细胞敲低AKT2。

3 .蛋白质提取和 Western Blot收取心脏组织后,用 PBS 缓冲液清洗干净并吸干水分,使用液氮速冻,存于-80℃,用蛋白裂解液提取总蛋白。

利用 10%的 SDS-PAGE 分离大约 30mg 蛋白样品,然后将蛋白转移到 PVDF 膜上用含 2%BSA 的TBST 溶液封闭并洗涤后,加入抗 A K T 2,mTOR的一抗孵育,4℃过夜。

洗涤,加入偶联辣根过氧化物酶的二抗孵育,洗涤后加入化学发光液后显色。

4 .实时定量 PCR用 TRIzol 试剂提取总 RNA,经逆转录 PCR(Reverse-Transcript PCR)后得到 cDNA,然后利用实时定量 PCR(Real-Time PCR)检测 Col1a1,Col3a1,AKT2,mTOR,P70S6K,Mmp9,Periostin 的表达量。

5.组织学评估利用苏木精和伊红染料对小鼠心脏组织进行 Hty acids,LCFA) 的beta;氧化,获取的脂肪酸除供线粒体氧化功能外多余的部分以三酰甘油的形式储存于心肌细胞的脂滴中,并在需要时由三酰甘油酯酶水解为脂肪酸和甘油。

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