一．课题研究背景、研究目的及意义
PAR4受体是是蛋白酶活化受体PARs受体家族的一员，PARs属于G蛋白偶联受体家族成员, 其N-末端被蛋白酶裂解后,可形成新的N-末端,新N-末端能够结合、激活自身受体。PAR4激活、灭活、脱敏、复敏、及其与信号转导途径的关系,尤其是与疾病的关系正倍受关注,并且PAR4具有广泛的生物学效应,参与血液和呼吸道慢性炎症在内的诸多疾病的发生、发展过程,因而受到日趋增多的关注。
Kahn和Xu于1998年发现了PAR-4,他们克隆了PAR-4的基因并从淋巴瘤daudi细胞中得到了它的序列，全长共4.9kb。PAR4与其他PARs有相同的特点:它们均由细胞外区(N-末端和细胞外袢)、跨膜区(7次跨膜螺旋)及细胞内区(细胞内袢和C-末端)组成。C-末端与受体脱敏和信号转导有关;N-末端有相应受体的蛋白酶裂解位点,细胞外袢2则在PARs激活中起关键作用。PAR4和PAR2的第4个跨膜区域有34%的同源性,由385个氨基酸组成,包含一个信号肽和1个N末端Arg /Gly丝氨酸蛋白酶结合位点,和其它3种PARs有33%的同源性,但是它的N末端和C末端的氨基酸序列和其它3种有明显的不同,它的2个外显子和其它3种相似。
最初在血小板中检查出的受体是PAR1，这为研发新型抗血栓药物提供了一个新的药物机制和靶点，引起学术界和制药业的广泛关注。虽然这些年来报道了很多种凝血酶受体拮抗剂，但只有少数有良好的拮抗活性。以PAR-1为靶点的药物如vorapaxar有出血不良反应，尤其是对有中风史的患者,脑颅内出血几率增加。但是通过研究小分子化合物PAR-4选择性拮抗剂如YD-3，发现YD-3抑制由PAR-4激动肽GYPGKF诱导的血小板聚集，但对PAR-1激动肽SFLLRN、凝血酶、胶原和U46619诱导的血小板激活没有抑制作用。经过一系列研究发现拮抗PAR-4出血事故的风险相对较低。
- 课题解决的问题
PAR4抑制剂具有良好拮抗凝血酶受体的活性并且其较低的出血事故的风险意味着很好的临床前景。现在对于PAR4抑制剂，目前还没有相应药物上市，并且对其体外研究的报道不多。本课题旨在建立PAR4抑制剂的体外筛选模型并且筛选出具有良好PAR4抑制剂活性的化合物。
- 课题研究方法和手段
1．实验对象： 人富血小板血浆（PRP）
2. 实验试剂： 3.8%柠檬酸钠，瑞福丹，gamma;-凝血酶
3. 实验方法：
3.1 设置对照组及实验组，包括阴性组对照、阳性组对照、溶媒对照组和实验组。
3.2 制备富含血小板的血浆 (PRP)。
