课题来源：自拟课题
课题依据：
急性肝衰竭（ALF）是大多数肝病的严重后果，在临床中，对乙酰氨基酚引起的肝衰竭是所有急性肝衰竭的重要原因。在欧美国家，药物是引起的急性与亚急性肝衰竭的主要原因，其中对乙酰氨基酚是最主要的；在我国对乙酰氨基酚是仅次于肝炎病毒引起肝衰竭的重要原因。因此，本课题采用对乙酰氨基酚建立急性肝衰竭模型，进一步探究有效治疗急性肝衰竭的药物及作用机制，此研究具有十分重要的临床意义。
对乙酰氨基酚（APAP），又名扑热息痛，属于常用解热镇痛药的主要成分，由于其属于家用常备非处方药很容易因同类药物重复使用导致剂量叠加或单用长期服用，导致对乙酰氨基酚积累过量，而造成肝组织损坏，严重发展成肝衰竭危机生命。
千层纸素苷作为天然黄酮类化合物，是千层纸素体内主要的代谢产物。目前已有报道其具有抗急性肠炎的功效，在此我们初步打算探究千层纸素苷抗急性肝衰竭的作用。
本课题从APAP模型建立入手，探究千层纸素苷抗APAP导致急性肝的作用及机制。为临床用药安全提供新的有价值的参考。
主要解决的问题：
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急性肝衰竭（APAP）模型的建立及药效检测
- 药物造模
将6-8周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为control（5只）、模型组、千层纸素苷组，每组各12只。腹腔注射300mg/kg对乙酰氨基酚后1小时后，给予千层纸素苷80mg/kg。在给予APAP 2小时、8小时、16小时后每组分别处死4只。
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- 谷丙转氨酶检测
小鼠处死后收集血液，4度储存，送至中大医院血生化检测谷丙转氨酶的活性
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- 免疫印迹
小鼠处死后，取肝组织冻于-80。实验前取体积约1立方厘米组织于匀浆器中，研磨，离心，收集细胞，洗涤。将上述细胞悬液离心弃上清，用适量冷细胞裂解液重悬细胞，冰上放置1 h，充分裂解细胞，4 ℃、12000 rpm离心30 min，上清液为提取的总蛋白。依试剂盒说明用BCA法定量蛋白，将各组蛋白稀释至100 mu;g，按1:1与2 times; SDS凝胶加样缓冲液混匀，98 ℃变性5 min，进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，60 V浓缩胶，120 V分离胶，2.5～3 h。电泳后取下胶，按尺寸剪取合适大小的Whatmann滤纸及硝酸纤维素膜，上下各三层滤纸，中间为胶和膜，胶在负极，膜在正极，用玻棒仔细赶除气泡，采用半干式转膜，恒流75 mA，时间为膜面积乘以系数1.6，转移蛋白到硝酸纤维素膜。将转入蛋白的硝酸纤维素膜浸入丽春红工作液中，染色2～5 min，蒸馏水冲洗，观察转膜效率，标记蛋白，用PBST洗去丽春红条带。用10%脱脂奶粉，37 ℃封闭1 h。弃封闭液，用少量PBS将残余奶粉漂洗干净，封口机将各条膜封闭于自封袋中，尽可能排除气泡，PBST稀释至工作液浓度的一抗，37 ℃恒温摇床孵育1～2 h，4 ℃孵育过夜。弃一抗，用PBST清洗3次，10 min/次。用PBST稀释二抗至工作液浓度，按前法封袋，37 ℃恒温摇床避光孵育1 h。反应结束后弃二抗，用PBST清洗3次，10 min/次；PBS清洗2次，6 min/次，Odyssey近红外荧光扫描成像系统下扫膜。
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