开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题背景
N-亚硝胺是一类以亚硝基－NO的氮原子与氨基中的氮原子连接，并在氨基上发生取代而生成的一类化合物，在碱性溶液中稳定。其生成机制多样，包括仲胺类化合物与亚硝酸之间的相互作用，叔胺类化合物与一氯胺之间的亲核取代反应，溶剂N，N二甲基甲酰胺（DMF）的氧化，橡胶硫化剂与空气中氮氧化合物相互作用等。N-亚硝胺类化合物具有强致癌作用和明显的肝毒性，不但长期小剂量接触可以致癌，而且1次较大剂量的冲击也可以引发癌症。此类化合物常出现在腌制类食品、化妆品、烟草、水、药品等物质中，对人体健康具有极大的危害[1]。2018年7月，在全球市场主流的降压药物缬沙坦中检出超量的NDMA，严重威胁患者的生命健康，全球20多个国家和地区紧急召回缬沙坦原料及制剂，成为全球关注的“缬沙坦事件。
目前国内外对药品中的NDMA检测方法研究报道较少，由于气相色谱-质谱（GC-MS）的高选择性和低检测水平，大多数的文献都采用GC-MS或气相色谱-串联质谱法（GC-MS /MS）等检测方法。气相色谱-热能检测器（GC-TEA）对亚硝胺也有很高的选择性。中国食品药品检定研究院检测缬沙坦中药物的GC-MS方法，采用甲醇溶解样品后直接进样，但缬沙坦易溶于甲醇，大量不挥发性物质进入质谱系统，易污染离子源，造成背景噪音升高。而美国食品药品监督局（FDA）采用二氯甲烷作为提取溶剂直接进样，这种方法不仅基质效应大，而且二氯甲烷的强挥发性对准确定量也有一定的影响[2]。此外，FDA发布了一种顶空(HS)注射和气相-质谱（GC-MS）联用方法，用于检测缬沙坦药物中的NDMA，报道的定量限(LOQ)为0.3 mg/kg[3]。咸瑞卿[2]等人也用甲醇溶解直接进样，但利用热能分析仪对亚硝胺杂质进行特异性检测。他们参考国家药典委员会《关于缬沙坦国家标准修订稿的公示》，采用GC-MS法检测缬沙坦中NDMA，结果显示 GC-MS与GC-TEA 2种测定方法结果无显著性差异。且GC-MS法比GC-TEA特异性差，背景和基质干扰较多，定性定量离子保留时间附近有较多干扰色谱峰，影响低浓度样品的定性定量准确性。
由于气相色谱只能分析挥发性物质或高温可气化物质，限制了热不稳定药物、有机酸碱的极性化合物的检测，开发运用专属性强，灵敏度高的液相色谱检测法对药物中亚硝胺杂质的测定十分重要。欧盟在法国的官方药品控制的实验室[3]使用配备紫外-可见检测器的液相色谱仪，在228nm波长处对药物中的N-亚硝基二甲胺进行测定，NDMA的保留时间为4.5min,定量限为3.2ng/ml。范婷婷[3]等人运用高效液相色谱-光电二极管阵列检测器（HPLC- SPDM30A）对缬沙坦中的NDMA进行测定，检测波长为228nm，以甲醇和水为流动相进行梯度洗脱，得到NDMA的检测线为0.001ug/ml，定量限为0.003ug/ml，NDMA对照品溶液质量浓度在0.003～1ug/mL范围内时，测试结果的线性关系良好，相关系数为1。欧盟在德国的官方药品控制实验室[4]使用超高速液相色谱联合大气压离子源三重四级杆质谱（APCI-UHPLC-MS/MS）方法对药物中N-亚硝基二甲胺进行测定，以N-亚硝基二甲胺-D6标准品（N-nitrosodimethylamine-d6）为内标，内标法定量，规定检测线为10ng/ml。
超高效液相色谱与传统的高效液相色谱相比，全面提升了液相色谱的分离效能，不仅提高了分辨率，也使检测灵敏度和分析速度大大提升。本研究拟建立了超高速液相色谱-大气压离子电离源-串联质谱联用法（UHPLC-APCI-MS/MS）法可用于快速检测替莫唑胺中的亚硝胺杂质，该方法专属性强，重复性好，灵敏度高，适用于常见药物中亚硝胺杂质的测定。
- 要解决的问题
建立快速，简便，专属性强，重复性好，灵敏度的超高效液相-串联质谱法对常见药物中亚硝胺杂质进行检测。
- 可行性分析
超高效液相色谱与传统的高效液相色谱相比，全面提升了液相色谱的分离效能，不仅提高了分辨率，也使检测灵敏度和分析速度大大提升；MS/MS的优点,对结构相近的亚硝胺类杂质专属性强，不会造成假阳性结果；灵敏度高可以检测到痕量杂质。
- 研究方法和内容
1.仪器与试剂
表 2 仪器设备
