开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究目的
甜味剂是赋予食品或饲料以甜味的食物添加剂。按来源，可分为天然甜味剂和人工合成甜味剂；按营养价值，可分为营养性甜味剂和非营养性甜味剂。随着有机化学的发展，人工合成的甜味剂逐渐占据主导地位，但由于部分化学合成甜味剂被怀疑有安全问题，因此世界上多个国家已先后禁止使用这部分甜味剂。鉴于此，寻找安全无毒、甜味纯正的甜味剂具有极其重要的意义。而甜味蛋白具有高甜味、低热量、无毒安全等优点，因此有望成为新型的保健型甜味剂。
二、拟研究或解决的问题
1、甜味蛋白的三位点碱基突变；
2、甜味蛋白原型和突变型的表达、分离和纯化；
3、测定比较甜味蛋白原型和突变型的甜度与稳定性。
二、研究手段
1、根据文献发现E2N、E23Q、Y65R三个较为良好的突变位点，根据突变位点设计合适的三对引物对目标质粒依次进行扩增；将每次扩增得到的产物进行电泳，将对应大小的产物进行胶回收，重组后转化到大肠杆菌中，得到重组质粒，对它进行测序，这一步得到的产物即为下一次PCR的模板，依次进行3次PCR扩增，得到三位点突变的突变型甜味蛋白。
2、将重组质粒转化到大肠杆菌中进行表达，超声破碎后，得到超声上清，用镍柱亲和层析纯化，并通过SDS-PAGE分析，得到目的蛋白。将所得蛋白透析到蒸馏水中，超滤浓缩，最后用BCA法测定蛋白浓度。
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