课题名称 非天然氨基酸3-硝基酪氨酸在蛋白中的引入及表达课题性质 基础研究radic;应用课题 设计型 调研综述 理论研究开题报告内容：（包括研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）1. 研究背景蛋白质修饰是改善其物理化学和生物学特性的一种重要方法，目前已成为生物技术、生物催化和生物医学领域的研究热点。
蛋白质仅仅用20种天然氨基酸执行了一系列显著功能，仅有的20种天然氨基酸携有的功能基团数量有限，无法满足化学、生物科学研究和应用中对蛋白质结构和功能的需求目前，通过化学修饰、基因定点突变和计算机辅助蛋白质设计，虽然对蛋白质的结构改造赋予了天然蛋白质新的功能，但这些方法都依赖于20种天然氨基酸本身，其用于修饰改造的功能基团仅有巯基、羟基、羧基、氨基等几种有限基团，功能化方式十分有限。
与此相反，可人为赋予多样性功能基团的非天然氨基酸（ Unnatural Amino Acids，UAAs）在蛋白质修饰中表现突出，这些UAAs含有酮基、醛基、叠氮、炔基、烯基、酰胺基、硝基、磷酸根、磺酸根等多样性功能基团，可进行多种修饰反应，如:点击化学、光化学、糖基化、荧光显色等反应，通过UAAs对蛋白质进行修饰给其结构和功能的理论研究与应用带来了新的契机。
2. 研究的意义和目的本课题拟对詹氏甲烷球菌（Methanocaldococcus jannaschii）酪氨酸氨酰tRNA合成酶对进化（MJRS-TyrtRNA），对目的蛋白GFP任意位点定点引入3-硝基-酪氨酸（3-NO2-Tyr）修饰。
探讨转录因子硝基定点修饰对T细胞分化奠定基础。
3. 研究内容1) 查阅文献，获取MJRS-TyrtRNA进化位点Y32H、L65L、H70C 、D158S、I159A、L162R。
2) 在实验室已有酶对MJRS-TyrtRNA，引入对硝基苯丙氨酸的酶对基础上。
PCR扩增搭桥、酶切连接、转化、测序验证。
3) 进化的MJRS-TyrtRNA与GFP共转DH10B，诱导表达纯化，质谱鉴定分析。
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