一. 研究目的本课题通过改变纯化工艺路线中蛋白质层析系统的条件,对纯化样品的几种层析柱的种类、介质、缓冲液的pH等影响样品洗脱峰的条件进行探索,再通过检测手段检测蛋白质的浓度,最终得到最优的纯化工艺方案,得到高纯度的目标蛋白。
二. 文献综述2.1 FTase的研究背景法尼基转移酶(farnesyltarnoforase, FTase)是一种细胞溶质中的酶,广泛存在于哺乳动物细胞、酵母中,催化细胞多肽翻译后修饰的第一步骤(法尼基化),底物包括Ras蛋白、核纤层蛋白A、B、视紫红质激酶、磷酸化酶激酶等。
FTase是由48kD的alpha;和一个46kD的beta;亚单位组成的异二聚体,alpha;亚单位识别法尼基焦磷酸,beta;亚单位结合至Ras蛋白。
Ras蛋白在真核细胞的生长过程中起着非常重要的作用,遗传学、生物化学及分子生物学等方面的研究表明,Ras在细胞增殖分化信号从激活的跨膜受体传递到下游蛋白激酶的过程中处于中枢地位。
研究发现约有30%的肿瘤中存在Ras基因突变,而 Ras蛋白的生物活性与法尼基化修饰有密切关系, Ras蛋白是一种膜结合的 GTP/GDP 结合蛋白,法尼基转移酶(FTase)是Ras蛋白活化过程中的关键酶,干扰Ras蛋白的法尼基化能有效地抑制肿瘤的生长。
因此FTase已成为抗癌治疗的一个重要靶标,研究项目通过重组法尼基转移酶完成FTase菌种复苏、发酵流程改进及纯化工艺研究,本课题选择对其纯化工艺进行研究。
2.2 研究意义肿瘤疾病是影响着世界死亡率的一个指标,不同类型的肿瘤的治疗,在蛋白质、酶的受体抑制剂、介质的信号通路,肿瘤细胞凋亡诱导剂,类固醇化合物和疫苗等都进行过探索。
一些最有前途的研究信号通路包括Ras-MAPK和phosphoinositol-3-kinase ,信号通路的变化导致许多细胞功能产生生长及增殖分化的变化。
这些信号级联与Ras蛋白密切相关。
