一．拟研究的问题瘤菌素是一种含氧杂环并萘醌类抗生素,1957年首次从橄榄色链霉菌(Streptomyces olivaceus)中分离鉴定。
前期研究发现，瘤菌素具有显著的抗革兰阳性菌和原生动物活性,对小鼠淋巴癌P-388细胞、人口腔表皮样癌症细胞株KB等也有较强的细胞毒活性，除此之外还对多种细菌有抗菌作用，能止咳、促进肠管运动、促使神经兴奋和肌肉麻痹，对小鼠黑色素瘤也有明显的抑制作用。
本课题重在研究瘤菌素对临床耐药菌MRSA、MRSE和临床常见病原菌的抑菌活性以及对包括肝癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、白血病五种肿瘤细胞株的细胞毒活性，为后续的成药特征评价提供基础。
二．实验目的本实验主要通过体外抑菌和细胞毒活性分析方法，检测它们对临床耐药菌MRSA、MRSE和临床常见病原菌的抑菌活性以及对包括肝癌、胃癌、乳腺癌、黑色素瘤、白血病五种肿瘤细胞株的细胞毒活性，为后续的成药特征评价提供基础。
三．实验方法1.体外抑菌实验测定样品最低抑菌浓度。
2.细胞毒活性分析方法对耐药菌的细胞毒活性。
四．实验流程1.最低抑菌浓度的测定 制备培养基（600mL LB培养基，200mL沙氏培养基，200mL肉汤培养基）→接种耐药菌（各种菌浓度均为1%）→培养菌（28℃ 8h）→观察抑菌性（96孔板加瘤菌素、耐药菌、营养肉汤孵育）→记录最低抑菌浓度采用96孔板测定最低抑菌浓度。
瘤菌素样品用生理盐水稀释，使其最终浓度为50uM、25uM、10uM、5uM、1uM、0.1uM、0.01uM、0uM。
针对受试MRSA、MRSE、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌六种耐药菌，向每孔加入肉汤培养基178uL，菌悬液20uL（菌液终浓度约为105CFU/mL），2uL样品，每种样品设三个平行家加样孔，以加终浓度为10ug/mL万古霉素、1%DMSO、培养基，为阳性对照、阴性对照和空白对照。
