- 研究背景介绍：
中药毛冬青（Ilicis Pubescentis Radix）为冬青科植物毛冬青Ilex pubescens Hook. et Arn.的干燥根，主产于我国广东、广西、江西、福建等地。为我国南方常用中药。传统中医药理论认为其有具活血通脉、消肿止痛、清热解毒之功效，民间常用于预防流感,治疗感冒、哮喘、扁桃体炎、中风瘫痪、烧烫伤、跌打损伤、止血、痈肿等症。现代研究表明，毛冬青含有三萜酸及其苷类、黄酮类、木脂素类、酚酸类、脂肪酸及糖脂类等多种化学成分，具有扩张血管、抑制血液凝集、预防血栓形成、抗炎等生理活性。其中三萜皂苷类成分被普遍认为是毛冬青中主要活性成分。
然而，目前毛冬青的整体研究尚不深入，由于缺乏合理、完善的质量控制方法，使得市售毛冬青不但品种混乱，其制剂质量也难以得到控制。例如毛冬青中不含芦丁，但大多数毛冬青制剂却以芦丁为指标成分测定总黄酮。因此建立可行、有效、全面的毛冬青药材质量控制方法是有必要的。本实验从毛冬青中主要活性成分出发，通过薄层色谱鉴别、含量测定、指纹图谱三种手段，建立起毛冬青质量控制方法，以期在全面反映毛冬青药材内在质量的同时，为药效物质基础研究提供依据并确保临床安全、有效。
《中国药典》1977版一部曾收载了毛冬青药材，但无薄层鉴别和含量测定项。有地方标准如《湖南省中药材标准》（2009版）、《广东省中药材标准》(2011年)，都对毛冬青药材的薄层鉴别方法进行了规定。根据文献报导，曾宪仪等使用薄层色谱法鉴别了毛冬青药材;应鸽等使用薄层荧光色谱法考察了毛冬青及其同属植物在化学成分上的差别;郑倩等通过薄层色谱法鉴别了毛冬青和其常见混伪品毛冬青茎。
近年来，研究人员在毛冬青药材含量测定方面做出了许多贡献。刘毅等使用高效液相色谱法-二极管阵列检测器对毛冬青药材中neopubescensin的含量进行测定，陈新菊等使用高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定了毛冬青药材中Ilexgenin A的含量, 周渊等使用反相高效液相色谱法-二极管阵列检测器同时测定了毛冬青药材中4种三萜皂苷类成分和2种木脂素类成分。
指纹图谱方面，余成霞等建立了毛冬青药材的RP-HPLC指纹图谱，应鸽等建立了毛冬青药材的HPTLC指纹图谱。郑夏生等建立了毛冬青同属药材岗梅的HPLC指纹图谱，Chunlin Fan等建立了毛冬青同属药材大叶冬青的UPLC指纹图谱，为本次研究提供了实践基础。
本实验在建立起毛冬青药材薄层色谱鉴别方法的同时，选用毛冬青中主要活性成分三萜皂苷皂苷类成分冬青素A（Ilexgenin A）为外标，使用高效液相色谱法测定毛冬青根脂溶性成分中三萜类含量。同时建立高效液相色谱指纹图谱，为控制毛冬青内在质量提供参考。
图1 冬青素A结构式
- 实验材料
2.1仪器：Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2999二极管阵列检测器，C18色谱柱（4.6mm*250mm,5mu;m），超声波清洗器（500W,40KHz），
2.2试剂：乙腈（色谱纯），甲醇、磷酸（分析纯），超纯水
