背景介绍：
硫化氢（H2S）作为一种无色具有 臭鸡蛋气味的有毒气体, 人类对其作用的认识和研究已有30 多年历史。近年的研究发现，它是继一氧化氮(NO ) 和一氧化碳(CO ) 的第三类气体信号分子。实验证实, 包括人类在内的哺乳动物可代谢生成内源性的H2S, 发挥广泛生物学效应, 在神经系统、消化系统、泌尿系统、心血管系统中都有重要生理作用和病理生理意义。
已有研究表明，H2S与NO、CO一样，也是一种活性较高但极不稳定的生物递质，是细胞信号分子气体递质家族的成员。H2S能自由扩散进入细胞膜发挥细胞内的信号调节作用，因而减少了对膜受体和第二信使系统的需求。H2S还能激活多条信号通路，促进化学修饰。大量研究报道，硫化氢对心血管系统具有重要的生理功能及病理生理意义，主要包括：舒张血管、负性肌力、抑制血管重构、心肌保护等。H2S对心血管疾病也有重要意义，如对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用，可以影响血管重塑和心肌重塑等。
心肌细胞的电生理主要由内向的钾离子、外向的钠离子和钙离子组成。钠通道是最重要的心肌细胞膜去极化阳离子通道之一。它决定了0相动作电位的形成与幅度,是Ⅰ类抗心律失常药物的靶蛋白。钠通道广泛存在于心房肌、心室肌及蒲肯野氏纤维。因此,钠通道开放正常与否直接影响到心脏的生理病理功能及临床疗效。
研究意义：
本研究通过急性分离小鼠心肌细胞，应用膜片钳技术，记录正常情况下的钠电流，并在此基础上给予一定浓度的H2S供体硫氢化钠NaHS ，研究NaHS对心肌细胞钠通道电流及其通道动力学的影响。
实验设计：
课题计划以成年小鼠为对象，采用的Langendorff 逆行主动脉灌注酶溶液消化的方法，急性分离小鼠心肌细胞，选取复钙后仍维持杆状形态，胞膜完整，纹理清晰且呈静息状态的耐钙细胞，以全细胞膜片钳技术测定其钠电流，并观察加入硫化氢（H2S）后钠电流的变化情况，从而了解硫化氢（H2S）对心肌细胞的保护作用。
课题主要分为两部分，分离小鼠心肌细胞和采用膜片钳技术记录钠通道电流。根据文献报道，我们采用 Langendorff 的方法对小鼠心脏进行灌流，并以胶原酶进行消化，最终获得心肌细胞。即：（1）无钙台式液灌流；（2）低钙酶液灌流。该方法最大优势在于较大限度地缩短心脏灌流时间，减轻心肌缺血缺氧，简化了操作步骤。此过程中，实验条件仍需摸索，灌流的流速、消化的时间、酶解的程度、实验的温度等等都需要在实践中慢慢调整到最适宜的条件。
