一、研究背景与研究目标
多巴胺D1受体是G-蛋白偶联受体超家族成员之一，广泛分布在中枢神经系统，它在躯体运动，学习记忆，药物成瘾中起重要作用。大量研究表明D1受体激动剂能够改善学习记忆，促进Abeta;降解，有望成为治疗AD的新靶点。本实验以稳定转染了D1受体的CHO细胞为基础，采用LANCEcAMP法，通过确定最佳细胞数，最佳刺激时间，已知D1受体激动剂SKF81297验证和Z因子测定对模型进行条件优化和验证，建立可用于D1受体高通量筛选的细胞模型。
本实验是CHO-D1细胞的常规培养，包括细胞复苏以及细胞的换液与传代【1】。
高通量筛选技术（High throughput Sereening，HTS）是以细胞或者分子水平的实验方法为基础，以微孔板为载体，通过自动化操作系统，高效大量地检测样品，采集实验数据，并以计算机平台对样本进行分析，处理以筛选出目标样本的一种技术体系。常用于高通量筛选的第二信使生成主要包括：cAMP，Ca2 流，IP3等。cAMP检测适用于通过Gs或者Gi通路进行信号传导的GPCR受体。目前开发出来的检测cAMP的药物筛选方法较多，本研究采用以TR-FRET为基础的LANCE cAMP法【2】。
G 蛋白偶联受体（GPCRs）在大脑信号传递中至关重要，而在阿尔兹海默症（AD）中，G 蛋白偶联受体通过调控alpha;-、beta;- 及gamma;-分泌酶分泌、淀粉样前体蛋白（APP）生成及beta;- 淀粉样蛋白（Abeta;）降解，直接影响beta;- 淀粉样蛋白在神经系统信号级联反应。AD主要的病理学改变为脑内Abeta;的沉积并形成老年斑，tau蛋白的异常磷酸化聚集形成神经纤维缠结，神经元丢失，海马锥体细胞颗粒空泡变性等。其中，Abeta;的生成、代谢及毒性作用被认为是AD发病机制的中心环节【3】。
多巴胺受体作为GPCR的成员之一，根据其与G蛋白结合后的信号传导通路不同，可以分为两类：D1样受体（D1和D5）和D2样受体(D2，D3，D4)。D1样受体与Gs蛋白偶联，受到刺激后能提高腺苷酸环化酶（AC）活性，升高细胞内环磷腺苷（cAMP ）水平。D1受体是体内分布最广泛的、最受关注的多巴胺受体亚型之一。近年来，D1受体与阿尔兹海默症的研究受到了极大的关注。在前额叶皮质中，多巴胺通过D1受体介导的cAMP/PKA信号通路对学习记忆起着非常重要的作用，而学习记忆能力下降也是AD的重要临床表现【4】。
激动D1受体能保护海马神经元免受Abeta;低聚物导致的突触功能障碍，SKF81297，选择性D1受体激动剂能阻止Abeta;低聚物引起的海马神经元树突AMPA和NMDA受体减少，减弱Abeta;低聚物引起的海马切片LTP损伤。因此D1受体激动剂可能修复AD患者的突出功能障碍。在特定的情况下，多巴胺D1受体的激活可以增强海马CA1区的长时程增强，可以明显改善大鼠的空间学习记忆能力【5】。
高通量筛选模型的优化和评估，成功建立cAMP标准曲线，摸索最佳细胞数，确定最佳刺激时间，验证已知阳性药SKF81297与Z因子等，建立D1受体激动剂高通量筛选模型。Z因子是一个用于判断筛选模型稳定性的统计学参数。Zgt;0.5才符合高通量筛选标准，如果Z因子小于0.5，则说明模型建立条件还需要进一步优化【6】。
二、研究思路与研究方法
（一）研究思路
