开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
- 拟研究的问题
幽门螺旋杆菌(Hp)是诱导慢性胃炎,消化性胃溃疡甚至胃癌的重要因子,目前治疗Hp感染的临床药物如抗生素类药物和质子泵抑制剂,但都存在耐药性和不良反应,为此,Hp疫苗的发展或许成为预防与治疗幽门螺旋杆菌感染的最佳选择,本课题组前期通过胃浆膜下层接种Hp疫苗诱导胃组织驻留型T细胞的形成,由于前期本实验研究胃部建立一种新的疫苗接种方式中使用的铝佐剂在组织中形成肉芽肿并短时间难以消除,可能引起局部免疫稳态改变,TRM分布面积较少。针对此问题,寻求组织可吸收的缓释材料—丝素蛋白水凝胶;丝素蛋白水凝胶因具备缓释,可吸收,可原位成胶等优点。为此,本研究使用SF水凝胶作为疫苗载体相探究丝素蛋白水凝胶为载体相的Hp疫苗增强免疫反应并诱导胃组织驻留型T细胞的形成。
二.实验主要内容
本实验的研究包括以下几项内容:
- 丝素蛋白水凝胶Hp疫苗的制备
- 胃浆膜接种方式动物模型的建立
- 疫苗接种后胃组织细胞免疫反应的检测
- 疫苗接种后体液免疫反应的检测
5.诱导胃组织CD4 TRM形成的确证.
三.实验方法
- SF的制备(实验室前期探索完毕)
使用丝素蛋白溶解于Hp亚单位疫苗CCF蛋白水溶液(实验室前期构建的Hp疫苗),并与90%的PEG400等体积混合,丝素蛋白终浓度为80 mg/mL。
2胃浆膜接种方式模型的建立(实验室前期建立)
使用10mg/ml的戊巴比妥钠通过腹腔注射途径麻醉实验小鼠,剃掉小鼠腹部左上侧面积的毛发,小鼠手术所用器具全部灭菌,并在无菌环境下的恒温板进行,腹部朝上固定小鼠,沿腹部左上侧正中旁线剪开1cm长的开口,暴露出胃器官,使用针头33G的微量注射器吸取5ul的疫苗注射到胃黏膜下层,并用7-0 PGA可吸收缝合线连续缝合肌肉层,非连续缝合皮肤。
3疫苗接种后胃组织细胞免疫反应的检测
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