羌活为伞形科植物羌活Notopterygium inchum Ting ex H，T- Chang 或宽叶羌活 Notopterygium franchetii H. de Boiss. 的干燥根茎和根. 春、秋二季采挖，除去须根及泥沙，晒干. 羌活性辛、苦、温，归膀胱、肾经。
具有解表散寒、祛风除湿、止痛的功效，可用于头痛项强，风湿痹痛，肩背酸痛.[1] 就目前的研究而言，羌活除了具有原有已知作用外，还具有抗血栓，改善血液循环和抗心律失常的药理作用.[2-3]羌活始载于《神农本草经》，是中医临床常用解表药，祛风湿药. 而且作为中、藏、羌医药体系的常用药材，其药用历史悠久，历代本草及医书中皆有相关记载. 近几年来国内外对中药羌活中所含化学成分进行了化学研究工作，羌活的化学成分主要为挥发油、糖类、有机酸、香豆素、氨基酸及甾醇等，其中2015版中将《中国药典》羌活醇和异欧前胡素作为主要活性成分测定标准物质，规定其总含量不得低于0.4%，但在把控羌活的质量还需要建立羌活内在活性指标性成分标准. 参照2015版《中国药典》羌活的特征图谱峰所选对照峰为羌活醇、阿魏酸苯乙醇酯、异欧前胡素和镰叶芹二醇，都是脂溶性成分，[1]目前大多文献所报道的都是以甲醇做提取溶剂，而在临床应用中大多以水为媒介，大多数脂溶性成分在水中含量与在甲醇中有所差别，羌活中各物质成分也是有所差别. 故此次试验研究羌活在水中溶出成分到饮片和制剂的传递规律，以羌活醇和紫花前胡苷水溶性较大，并且在羌活中含量较高的成分为对照峰.[9-11]一、拟研究问题：兼顾生产工艺和质量标准要求，设计建立羌活从药材到饮片再到制剂的HPLC指纹图谱方法，寻找总结药材到饮片的成分传递规律，在炮制，制剂工艺稳定的下，为生产高质量的制剂设定合适的关键过程中工艺参数，实现控制羌活从药材到成品内在质量的目的，为后续研究和生产奠定基础.二、实验内容仪器和试药1.1仪器高效液相色谱仪：Agilent 1200高效液相色谱仪，VWD检测器；Agilent1260高效液相色谱仪，DAD检测器。
电子分析天平，超声清洗仪，离心机。
1.2试药羌活药材粉末，羌活饮片粉末和制剂标准物质. 甲醇，纯化水.2、方法2.1色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱，以甲醇为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温30℃，进样量3mu;l，流速0.5ml/min，检测波长为220nm。
时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0109025386235465450802051955609552.2羌活药材供试品溶液的制备取羌活药材或饮片粉末约1.0g，精密称定，置100ml锥形瓶，精密加入25ml水，加热回流（100℃）1h，冷却后均匀取10ml溶液离心，取离心后上清溶液过0.22mu;m水系超孔滤膜，取续滤液，即得。
2.3参照物溶液的制备取紫花前胡苷对照品5mg，精密称定，加50%的甲醇制成每1ml含100mu;g的溶液，即得.2.4测定方法照2.1色谱条件项下方法分别精密吸取羌活溶液3mu;l，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得.2.5方法优化过程2.5.1供试品溶液制备方法考察水回流提取取羌活药材粉末1g，精密称定，精密加入水25ml，加热回流提取60分钟，放冷，摇匀，上清液离心5分钟（转速为每分钟12000转），取上清液滤过，取续滤液，即得.50%甲醇回流提取取羌活药材粉末1g，精密称定，精密加入50%甲醇25ml，加热回流提取60分钟，放冷，摇匀，上清液离心5分钟（转速为每分钟12000转），取上清液滤过，取续滤液，即得.甲醇回流提取取羌活药材粉末1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，加热回流提取60分钟，放冷，摇匀，上清液离心5分钟（转速为每分钟12000转），取上清液滤过，取续滤液，即得.水超声提取取羌活药材粉末1g，精密称定，精密加入水25ml，超声处理（380w，37KHz）30分钟，放冷，上清液离心5分钟（转速为每分钟12000转），取上清液滤过，取续滤液，即得.2.6方法学考察2.6.1精密度考察在相同的色谱条件下，同一均匀供试品，连续6次取样测定，观察并比较其结果之间的接近程度，共有峰的相对保留时间 RSD 均小于 3%，相对峰面积 RSD 均小于 5%，表明仪器精密度良好.2.6.2重复性考察取同一供试品按2.2项下方法平行制备 6 份供试溶液，分别精密吸取3 mu;L自动进样，照2.4项下色谱条件进行测定，记录色谱峰图. 以紫花前胡苷为参照峰，计算共有峰的相对保留时间与相对峰面积，结果如显示共有峰的相对保留时间RSD均小于3%，相对峰面积RSD均小于6%，表明该方法重复性良好.2.6.3稳定性考察在24h内均匀时间间隔，分6或7次精密吸取按2.2项下方法制备的同一供试品溶液3 mu;L 进样，记录色谱峰图，以紫花前胡苷为参照峰，计算共有峰的相对保留时间与相对峰面积，结果显示相对保留时间RSD均小于3%，相对峰面积 RSD均小于6%，表明供试品在24h内稳定[5].2.7多批次测定利用以上色谱条件测定25批羌活药材，25批饮片和制剂的指纹图谱，验证色谱条件的可行性。
并运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算且生成对照指纹图谱，分析羌活药材、羌活饮片以及制剂过程中羌活成分的传递规律.[6]三、参考文献[1] 国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015:133[2]王世荣．中药羌活的药理作用及应用分析［J］．世界最新医学信息文摘，2015，15( 60) : 2 6．[3]张明发,沈雅琴.羌活药理学研究[J].中国执业药师,2008(05):28-30[4]彭任,王君阳,杨爱萍,王翠翠,胡杨,陆兔林,胡立宏,王吓长.羌活薄层色谱和HPLC指纹图谱结合多成分含量测定的质量评价方法研究[J].南京中医药大学学报,2020,36(05):629-634.[5]王玲娟,何佳玲,曾思娣,向梦孜,马婕文,李金玲.宽叶羌活标准汤剂UPLC特征图谱研究[J].湘南学院学报,2020,41(02):19-21 120. [6]梁慧慧,文雯,余格,毛妍,朱俊平,肖美凤,刘文龙,贺福元,张喜利,刘瑞连.羌活胜湿汤的质量稳定与传递规律研究[J].时珍国医国药,2020,31(01):75-78.[7]张亚军,谢放,张育,常黎明.羌活化学成分的研究进展[J].湖南农业科学,2017(04):124-126.[8]李英梅,王东,宋爽,赵丹奇,曲扬,梁朔,暴凤伟.羌活HPLC指纹图谱研究[J].辽宁中医药大学学报,2013,15(07):68-70.[9]刘志刚,李发美.羌活的HPLC指纹图谱[J].华西药学杂志,2008(01):89-91.[10]苏学燕,张剑光,哈马莫支阿木,扬子江,张志锋.基于UHPLC指纹图谱结合化学计量分析的羌活质量评价[J/OL].中药材,2020(12):2966-2970[2021-03-1].https://doi.org/10.13863/j.issn1001-4454.2020.12.022.[11]王倩,王相,杨梦婷,王鑫国,牛丽颖.不同基源羌活含量测定和指纹图谱结合化学模式识别研究[J].中国中医药信息杂志,2020,27(06):78-83.
资料编号：[370622]
