一、 研究目的及意义
癌症是现代人面临的重大生命健康威胁,并且有着逐年升高的发病率。传统疗法诸如放疗、化疗因同时杀伤肿瘤细胞和正常细胞而毒副作用大,但随着时代进步,各类新兴疗法也逐一问世。其中的新贵免疫检查点抑制剂,PD-1抗体通过抑制免疫检查点活性,重新激活T细胞对肿瘤的免疫应答。但实际使用中,除了对于一些类型的肿瘤患者有效率高以外,在其他病症的治疗方面效果并不明显。为了提高短期疗效,PD-1抗体常与一些药物联用。与此同时,一些研究表明PD-1的免疫耐受机制是与腺苷通路相关。所以,我们希望能够开发一个同时发挥抗PD-1和抗CD73的抗体,并且在获取抗体时,纯度与数量能令人满意。
基于2A肽能平衡上下游蛋白的表达,本实验以2A肽作为连接,将抗体的轻重链同步表达,以pCDH质粒作为载体,CrossMab技术作为构建策略,构建PD1/CD73双特异性抗体。
二、 研究或解决的问题
1、通过PEI将质粒瞬时转染293F细胞,表达双特异性抗体。
2、通过ProteinA柱完成PD1/CD73双特异性抗体的纯化。
3、用SDS-PAGE和Western Blot方法鉴定双特异性抗体。
4、用ELISA和Biacore测定双特异性抗体的抗原亲和活性。
三、 研究方法及手段
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