开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题背景
他汀类药物有治疗高胆固醇血症的作用已达到广泛共识。但近年来越来越多研究关注于他汀类药物潜在的不良反应，尤其是其诱发新生糖尿病和加重糖尿病的作用日益受到研究者的关注。FDA也于2012年宣布广泛使用的他汀类降胆固醇药物可能会升高血糖水平，导致记忆力减退，需要修改药物安全标签。
课题前期实验显示，阿托伐他汀治疗组的糖耐量确实显著高于溶剂对照组，且呈现剂量依赖性。说明阿托伐他汀确实有加重糖尿病的作用，且阿托伐他汀对C2C12细胞的糖利用和糖摄取有明显抑制作用。本课题旨在探究阿托伐他汀损伤糖利用的作用与其降低细胞内的胆固醇浓度是否成相关性。因此，建立一个测定细胞中胆固醇的方法并进行验证，对于进一步研究阿托伐他汀诱发心生糖尿病的机制研究显得尤为重要。
传统胆固醇测定是首先使胆固醇氧化或者分解，产生的中间产物再与显色剂反应，一方面得到的值是间接测定的结果，受试剂的影响大，干扰因素多；另一方面，所需样品量较大，不利于微量分析。因此，已不大采用。国内已有采用高效液相色谱法测定细胞内的胆固醇的例子，并证明其是一种有效的方法。但是，由于胆固醇是非极性分子，对色谱柱和流动相体系均有严格的要求。由于质谱分析法在微量测量中优势，在分析化学尤其是生物医学中应用越来越广。因此，我们探索用高效液相色谱-质谱联用法测定细胞内胆固醇。
- 要解决的问题
1、质谱方法的建立和优化：根据胆固醇的性质，探索选择合适的离子源（ESI/APCI）。
2、色谱方法的建立和优化：根据胆固醇的性质选择合适的色谱柱流动相。
- 可行性分析
。由于胆固醇酯不是单一的物质，而且胆固醇酯的各个组分缺少商业化的标准品，因此就不能够直接测出胆固醇酯。我们采用皂化方法将结合的胆固醇用水解成游离胆固醇，测定总胆固醇因此，液-质联用法测定游离胆固醇及总胆固醇都很方便快捷。
液-质联用法测定细胞内胆固醇，相对其它传统的检测方法而言有以下几点优点：1、灵敏度高，重现性好好；2、所需细胞量少；3、选择性强，干扰少。因此，用液-质联用法测定细胞内胆固醇具有可行性。
- 研究方法和内容
1、细胞培养：本次实验采用的细胞为C2C12（小鼠成肌细胞），先在DMEM（含10%胎牛血清）培养基中维持培养，当细胞达到融合换成DMEM（含2%马血清）培养基，每隔一天更换一次。待分化的C2C12融合成肌管培养完毕，将培养完成后的细胞处理。
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